熒光微球的免疫層析法快速檢測黃曲霉毒素B1

熒光微球的免疫層析法快速檢測黃曲霉毒素B1

檢測原理：應(yīng)用時間分辨熒光競爭抑制免疫層析的原理，當(dāng)將樣品滴加在加樣區(qū)時，樣品中的待測物與結(jié)合墊中的熒光微球標記抗體結(jié)合并通過毛細作用向前層析，當(dāng)達到檢測區(qū)后，檢測線 T 線上固定的抗原與剩余的部分熒光微球標記抗體結(jié)合，檢測線 T 線上結(jié)合的熒光微球標記抗體的量與樣品中待測物的量成反比，質(zhì)控線 C 線結(jié)合的熒光標記物樣品中待測物的量無關(guān)，其它熒光標記物繼續(xù)層析達到吸收區(qū)。層析結(jié)束后，用CSY-YG701讀取 T 線和 C 線的熒光強度并計算 T/C 值，通過儀器內(nèi)置的標準曲線即可計算出樣品中待測物的含量。

 

一、實驗所需器皿準備

1、CSY-YG701黃曲霉毒素?zé)晒舛繖z測儀（深圳市芬析儀器制造有限公司）

2、電子天平（國產(chǎn)）

3、離心機（國產(chǎn)）

3、粉粹機（國產(chǎn)）

4、渦旋振蕩器（國產(chǎn)）

5、可調(diào)移液器1000-5000ul 可調(diào)移液器 20-200ul（國產(chǎn)）

 

二、樣品前處理

1、準確稱取2.0g粉碎均勻的谷物樣本，放入50ml離心管或者錐形瓶中，加入10ml樣品提取液，用旋渦振蕩器震蕩3分鐘混勻，混勻后即為樣品液。

2、混勻后，取1.5ml均勻的樣品液在離心管，并在3500轉(zhuǎn)以上離心5分鐘。

3、取離心液上清液200ul+1000ul樣品提取液震蕩5秒混勻即為待測液。

 



 

三、樣品檢測

1、開始檢測：取60ul待測液+60ul熒光標記物,放入新的離心管中，把移液器刻度調(diào)至90ul，然后在離心管中吸吐3次液體（避免氣泡出現(xiàn)），混勻之后取90ul滴入檢測卡內(nèi)（本步驟應(yīng)該在30s內(nèi)完成），滴入完成之后，立即將檢測卡放入恒溫孵育器內(nèi)孵育8分鐘后進行檢測。